本發(fā)明涉及分析化學領(lǐng)域，具體涉及用液相色譜法分離和測定枸櫞酸馬羅匹坦及其光學異構(gòu)體的方法。
背景技術(shù)：
枸櫞酸馬羅匹坦(maropitantcitrate)，是一種1型神經(jīng)激肽(nk1)的受體拮抗劑，可通過抑制p物質(zhì)(引起嘔吐的關(guān)鍵性神經(jīng)遞質(zhì))而作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，也可抑制外周及中樞性嘔吐；其化學結(jié)構(gòu)如式(1)所示：
枸櫞酸馬羅匹坦為手性藥物，有兩個手性中心，即其有1個對映異構(gòu)體及2個非對映異構(gòu)體，共3個光學異構(gòu)體。該光學異構(gòu)體作為雜質(zhì)會影響枸櫞酸馬羅匹坦原料藥及其制劑產(chǎn)品的質(zhì)量，為了保證藥物的安全性，因此在生產(chǎn)過程中需要對其進行嚴格的質(zhì)量控制。
目前，含手性碳原子的對映異構(gòu)體分離一直是手性藥物合成和制劑過程中質(zhì)量控制的難點，且《美國藥典》usp、《歐洲藥典》ep及《中國藥典》ch.p均沒有記載枸櫞酸馬羅匹坦對映異構(gòu)體及其光學異構(gòu)體的分析方法，也未檢索到有關(guān)文獻報道枸櫞酸馬羅匹坦及其光學異構(gòu)體的分離檢測方法。
因此，發(fā)明一種分離和測定枸櫞酸馬羅匹坦及其光學異構(gòu)體的方法顯得尤為重要。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
術(shù)語定義
在下文或下文的內(nèi)容中，無論是否使用“大約”或“約”等字眼，所有在此公開了的數(shù)字均為近似值。每一個數(shù)字的數(shù)值有可能會出現(xiàn)1％、2％、5％、7％、8％、或10％的差異。
發(fā)明詳述
為了更準確的控制產(chǎn)品中光學異構(gòu)體的含量，保證原料藥以及制劑產(chǎn)品的質(zhì)量，本發(fā)明人經(jīng)過反復(fù)試驗及研究，開發(fā)了適合于枸櫞酸馬羅匹坦及其光學異構(gòu)體含量測定的分析方法。本發(fā)明的方法能簡單、快速、準確地分離、檢測出枸櫞酸馬羅匹坦及其光學異構(gòu)體，其分離度可達3.09-4.63。
本發(fā)明的目的在于提供一種用液相色譜法分離測定枸櫞酸馬羅匹坦及其光學異構(gòu)體雜質(zhì)的方法，適用于枸櫞酸馬羅匹坦藥物合成和制劑過程中的質(zhì)量控制。
一種應(yīng)用液相色譜法分離測定枸櫞酸馬羅匹坦及其光學異構(gòu)體的方法，其特征在于，采用以多糖衍生物為填料的手性色譜柱，以正己烷、異丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液或以正庚烷、異丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液為流動相。
在一些實施例中，所述手性色譜柱的多糖衍生物填料為直鏈淀粉-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)、纖維素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)、直鏈淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、直鏈淀粉-三[(s)-α-甲苯基氨基甲酸酯]、纖維素-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、纖維素-三[4-甲基苯甲酸酯]或其組合，在一些實施例中，多糖衍生物填料為直鏈淀粉-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)或纖維素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)。
在一些實施例中，所述的手性色譜柱為chiralpakie或chiralpakic,銷售廠家是大賽璐藥物手性技術(shù)(上海)有限公司，英文名daicelchiraltechnologies(china)co.,ltd。
在一些實施例中，所述流動相中正己烷、異丙醇、甲醇與二乙胺的體積比(v/v)為94:4.5:1.5:0.05；或者為95:3.75:1.25:0.05；或者為93:5.25:1.75:0.05。
在一些實施例中，所述流動相中正庚烷、異丙醇、甲醇與二乙胺的體積比(v/v)為94:4.5:1.5:0.05；或者為95:3.75:1.25:0.05；或者為93:5.25:1.75:0.05。
本發(fā)明所述的分離測定方法，包含以下步驟：
1)取任意光學純度的枸櫞酸馬羅匹坦或含任意光學純度的枸櫞酸馬羅匹坦的制劑樣品適量，用一定量的正己烷與乙醇的體積比(v/v)為4:1的混合溶液或流動相溶液作為稀釋劑溶解樣品；
2)設(shè)置儀器參數(shù)：流動相的流速、檢測波長、色譜柱的柱箱溫度；
3)取一定量步驟1)的溶液，注入高效液相色譜儀，完成枸櫞酸馬羅匹坦與其光學異構(gòu)體的分離測定。
步驟1)所述的枸櫞酸馬羅匹坦可以是任意光學純度的，作為檢測使用的枸櫞酸馬羅匹坦可以采用cn1048492c所公開的方法制備。
在一些實施例中，步驟1)所述的流動相溶液為正己烷，異丙醇，甲醇以及二乙胺混合溶液；在一些實施例中，所述的正己烷，異丙醇，甲醇以及二乙胺的體積比(v/v)為94:4.5:1.5:0.05；或者為95:3.75:1.25:0.05；或者為93:5.25:1.75:0.05。
在一些實施例中，步驟1)所述的流動相溶液為正庚烷，異丙醇，甲醇以及二乙胺混合溶液；在一些實施例中，所述的正庚烷，異丙醇，甲醇以及二乙胺的體積比(v/v)為94:4.5:1.5:0.05；或者為95:3.75:1.25:0.05；或者為93:5.25:1.75:0.05。
在一些實施例中，步驟1)所述的稀釋劑中每1ml稀釋劑含枸櫞酸馬羅匹坦樣品0.5mg至5mg；在另一些實施例中，步驟1)所述的稀釋劑中每1ml稀釋劑含枸櫞酸馬羅匹坦樣品1mg至3mg；在某些實施例中，步驟1)所述的稀釋劑中每1ml稀釋劑含枸櫞酸馬羅匹坦樣品2mg；在某些實施例中，步驟1)所述的稀釋劑中每1ml稀釋劑含枸櫞酸馬羅匹坦樣品5mg。
步驟2)所述流動相的流速為0.3ml/min至2ml/min；在一些實施例中，流動相的流速為0.8至1.1ml/min。所述檢測波長為220nm至300nm；在一些實施例中，檢測波長為230nm；所述色譜柱柱箱溫度為20℃至40℃；在一些實施例中，色譜柱柱箱溫度為35℃。
步驟3)所述樣品溶液進樣量為2μl至20μl；在一些實施例中，所述樣品溶液進樣量為3μl。
在一些實施例中，本發(fā)明所述的分離測定方法，包含以下步驟：
1)取枸櫞酸馬羅匹坦與其光學體的混合物或枸櫞酸馬羅匹坦或含枸櫞酸馬羅匹坦的制劑樣品適量，用流動相溶液或正己烷與乙醇的混合溶劑溶解樣品，并配制成每1ml含枸櫞酸馬羅匹坦0.5mg至5mg的樣品溶液；
2)設(shè)置流動相的流速為0.3ml/min至2ml/min，流動相的流速優(yōu)選為0.8至1.1ml/min，檢測波長為220nm至300nm，檢測波長優(yōu)選為230nm，色譜柱柱箱溫度為20℃至40℃，優(yōu)選35℃；
3)取步驟1)的樣品溶液2μl至20μl，優(yōu)選3μl，注入高效液相色譜儀，完成枸櫞酸馬羅匹坦及其光學體的分離測定。
其中：
所采用的高效液相色譜儀為美國agilent1260型高效液相色譜系統(tǒng)及工作站，
手性色譜柱選自chiralpakie或chiralpakic。
本發(fā)明采用以多糖衍生物為填料的手性色譜柱，以正己烷、異丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液或者以正庚烷、異丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液為流動相，可以將枸櫞酸馬羅匹坦與其光學異構(gòu)體進行有效分離，從而可以準確有效控制枸櫞酸馬羅匹坦的質(zhì)量。采用本發(fā)明所述的分離方法，分離檢測枸櫞酸馬羅匹坦及其光學體的時間在20分鐘以內(nèi)，本發(fā)明的方法能簡單、快速、準確的分離檢測出枸櫞酸馬羅匹坦及其光學異構(gòu)體，分離度可達3.09-4.63。
具體實施方式
為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面進一步披露一些非限制實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
本發(fā)明所使用的試劑均可以從市場上購得或者可以通過本發(fā)明所描述的方法制備而得。
本發(fā)明中，mmol表示毫摩爾，h表示小時，g表示克，ml表示毫升。
本發(fā)明中使用的儀器與色譜柱的規(guī)格為：
美國agilent1260型高效液相色譜系統(tǒng)及工作站；
實施例1-實施例4：以chiralpakie手性色譜柱分離檢測枸櫞酸馬羅匹坦及其光學異構(gòu)體的方法。
枸櫞酸馬羅匹坦有兩個手性中心，有1個對映異構(gòu)體及2個非對映異構(gòu)體，共3個光學異構(gòu)體。在實施例中，枸櫞酸馬羅匹坦簡稱(s,s)-mrpt，其對映異構(gòu)體簡稱(r,r)-mrpt，兩個非對映異構(gòu)體分別簡稱(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt。
實施例1
條件參數(shù)
紫外檢測波長：230nm；流動相：正己烷：異丙醇：甲醇溶液：二乙胺(95ml:3.75ml:1.25ml：0.05ml)為流動相；柱溫：35℃；進樣體積為3μl。
實驗步驟
稀釋劑：正己烷:乙醇＝80ml:20ml；取馬羅匹坦與非對映異構(gòu)體的混合物約20mg，置10ml容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
取供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。分別采用(s,s)-mrpt，(r,r)-mrpt，(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt對照品對色譜峰進行定位，圖1中保留時間為9.69分鐘的色譜峰為(s,s)-mrpt的色譜峰；8.63分鐘的色譜峰為馬羅匹坦的對映異構(gòu)體(r,r)-mrpt的色譜峰；11.34分鐘，12.99分鐘的色譜峰分別為馬羅匹坦的非對映異構(gòu)體(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt的色譜峰。
實施例2
條件參數(shù)
紫外檢測波長：230nm；流動相：正己烷：異丙醇：甲醇溶液：二乙胺(94ml:4.5ml:1.5ml：0.05ml)為流動相；柱溫：35℃；進樣體積為3μl。
實驗步驟
稀釋劑：正己烷:乙醇＝80ml:20ml；取馬羅匹坦與非對映異構(gòu)體的混合物約20mg，置10ml容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
取供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖2。圖2中保留時間為8.47分鐘的色譜峰為(s,s)-mrpt的色譜峰；7.66分鐘的色譜峰為馬羅匹坦的對映異構(gòu)體(r,r)-mrpt的色譜峰；9.70分鐘，10.99分鐘的色譜峰分別問馬羅匹坦的非對映異構(gòu)體(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt的色譜峰。
實施例3
條件參數(shù)
紫外檢測波長：230nm；流動相：正己烷：異丙醇：甲醇溶液：二乙胺(93ml:5.25ml:1.75ml：0.05ml)為流動相；柱溫：35℃；進樣體積為3μl。
實驗步驟
稀釋劑：正己烷:乙醇＝80ml:20ml；取馬羅匹坦與非對映異構(gòu)體的混合物約20mg，置10ml容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
取供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖3。圖3中保留時間為8.21分鐘的色譜峰為(s,s)-mrpt的色譜峰；7.46分鐘的色譜柱為馬羅匹坦的對映異構(gòu)體(r,r)-mrpt的色譜峰；9.28分鐘，10.43分鐘的色譜峰分別問馬羅匹坦的非對映異構(gòu)體(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt的色譜峰。
實施例4
條件參數(shù)
紫外檢測波長：230nm；流動相：正己烷：異丙醇：甲醇溶液：二乙胺(94ml:4.5ml:1.5ml：0.05ml)為流動相；柱溫：35℃；進樣體積為2μl。含枸櫞酸馬羅匹坦的制劑樣品如枸櫞酸馬羅匹坦普通片從zoetis購買。
實驗步驟
稀釋劑：甲醇；取枸櫞酸馬羅匹坦參比制劑0.5ml，置2ml容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，配制成5mg/ml溶液，搖勻，作為供試品溶液。
取供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖4，圖5。圖4為空白溶液譜圖，圖5中保留時間為7.39分鐘的色譜峰為(s,s)-mrpt的色譜峰；9.93分鐘的色譜峰分別為枸櫞酸馬羅匹坦的非對映異構(gòu)體(r,s)-mrpt的色譜峰。
本發(fā)明的方法已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明內(nèi)。